二、DNA序列测定的策略

把DNA克隆到质粒载体中，是得到测序模板DNA的最常用方法。克隆于pUC载体，则是直接采用双链DNA作为测序模板，待测DNA克隆到质粒载体后，通过碱变性处理重组载体，使测序引物便于结合模板DNA。但制备质粒DNA时可能会有少量细菌DNA或RNA污染，可能影响测序。任何待测DNA序列的片段克隆于上述载体后，都可按克隆位点两侧的载体序列设计合成寡核苷酸片段作为“通用引物”，该类引物可以与载体DNA序列互补结合，并以待测DNA为模板引导合成新生链，用DNA链末端合成终止法进行序列测定。图12‐3嵌套缺失法测定大 ......