方法学
答：测定抗感染药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的方法称为药物敏感性试验（antibiotic susceptibility test），简称药敏试验（AST）。药敏试验的目的是检测可能引起感染的细
答：“CLSI”指的是临床实验室标准化研究所（Clinical and Laboratory Standards Institute）（以前称NCCLS），是一个国际性的、学科间的、非盈利性的、制定标准的教育组织，它
答：在选择最适于试验和报告的抗菌药之前，每个临床实验室都应咨询感染科的医生，药房和医院药事委员会、治疗学委员会及感染控制委员会的医生，这样才能作出最佳选择。针对每一菌群
答：选择常规药敏试验所需要的抗菌药种类时，除参照CLSI文件外，尚需结合当地医院抗菌药的应用特点以及细菌耐药性的差异。因此，各医院之间常规药敏试验的抗菌药种类可能会有些差异
答：每种抗菌药都有其特定的抗菌谱，某种抗菌药对这类细菌的抗菌活性较强，但可能对另外一类细菌的抗菌作用就较弱。如第三代头孢菌素头孢噻肟对肠杆菌科细菌具较强的抗菌活性，但对
CLSI中所示的FDA批准的药敏试验的品种和报告表中的A、B、C、U和O组分别表示什么意思？答：“A组”为一级试验并常规报告的药物；“B组”为一级试验有选择报告
美国FDA批准的临床微生物学实验室非苛养细菌常规药敏试验和报告中应考虑的抗微生物药物的推荐美国FDA批准的临床微生物学实验室非苛养细菌常规药敏试验和报告中应考虑的抗微
答：S：敏感（susceptible，S），当一种细菌引起的感染，用某种药物的常规量时治疗有效，这种细菌即对该药高度敏感。即常规用药时达到的平均血药浓度为对细菌的最低抑菌浓度（minimum inhibit
答：CLSI标准文件来自美国，世界各地的药敏试验标准操作规程及结果判断标准文件有所不同，如英国采用的是英国抗微生物化疗学会（British Society for Antimicrobial Chemotherapy，BS
答：主要有扩散法和稀释法。扩散法是指纸片扩散法，即我们通常所说的K-B（Kirby-Bauer）法。稀释法中用琼脂培养基者为琼脂稀释法，用肉汤培养基者为肉汤稀释法；另外，还有E测定法（Epsilom
答：下列情况应进行药物敏感性试验：①已查明病原菌，需要帮助医师选择最合适的抗菌药物者；②为进行细菌耐药性监测和了解本地区的耐药性变迁，必须有细菌药敏测定结果以建立细菌耐药
答：临床上常因以下情况联合使用抗菌药：①用于病原菌尚未确定的急、重症感染的经验治疗，以扩大病原菌治疗的覆盖面；②治疗多种细菌所引起的混合感染；③对于某些耐药菌可取得协同抗
答：具体方法有肉汤稀释棋盘法、琼脂稀释棋盘法、单药纸片搭桥法、复合药物纸片法、纸条法等。以前两种方法的结果较为准确，但费时费材料，工作量大；纸片、纸条法等简便易行，但有时
答：根据FIC指数，抗菌药联合运用后的作用有4种类型：①协同作用，即两种抗菌药联合后的活性显著大于其单药抗菌活性的总和（FIC≤0.5）；②相加作用，两种抗菌药联合后的活性等于其单药抗
答：临床实践中为预防和延迟细菌耐药性的产生应做到：①针对感染病原菌选择已知抗菌作用最强药物，在可能情况下应尽量选用窄谱药物；②使用抗菌药时，剂量应给够，疗程应给足，以彻底杀灭
答：在进行体外药敏试验时，应根据抗菌药的作用特点和抗菌谱，结合患者的临床特点选择试验药物，选择药物的基本原则如下：①代表性：药敏试验所选抗菌药应具有代表性及对同类抗菌药有提
答：一般可包括以下药物：氨基苷类抗菌药阿米卡星和庆大霉素、氨基青霉素类抗菌药氨苄西林及其复方制剂氨苄西林/舒巴坦、羧基青霉素类抗菌药哌拉西林及其复方制剂哌拉西林/他唑
答：主要包括以下几种：头孢他啶、阿米卡星、庆大霉素、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、环丙沙星。该类细菌近年来对
答：阿米卡星、庆大霉素、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮、头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、环丙沙星、复方磺胺甲噁唑
洋葱伯克霍尔德菌药敏试验应选用哪些抗菌药？嗜麦芽窄食单胞菌药敏试验应选用哪些抗菌药？答：目前CLSI推荐用于洋葱伯克霍尔德菌纸片法药敏试验的抗菌药有四种：头孢他啶、美罗培南
答：主要包括青霉素、头孢西丁（检测MRSA菌株，药敏结果仍应报告为苯唑西林）、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑林、头孢呋辛、万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、环丙沙星、红霉素、克林霉素
答：主要包括氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦或阿莫西林/克拉维酸、头孢呋辛或头孢克洛、头孢噻肟或头孢他啶或头孢曲松、阿奇霉素、氯霉素、美罗培南或亚胺培南、环丙沙星或左氧氟
答：卡他莫拉菌为社区呼吸道感染的主要病原菌。一般情况下不推荐药敏试验，但作为流行病学、医院感染的控制和严重患者的医院管理，需要进行药敏试验。该菌因90%以上的菌株产&beta
答：根据最新版的CLSI（M100-S23）淋病奈瑟菌不推荐常规药敏。只有在治疗失败时需进行培养和药敏试验，药敏试验的品种必须包含头孢曲松、头孢克肟、环丙沙星和四环素，以及大观霉素等
答：该菌的药敏试验，需在生物安全柜（BSC）中进行。一般来说对与非侵袭性疾病的脑膜炎奈瑟菌的标本和培养物的操作可在2级生物安全柜（BSC-2）中，但对与极有可能产生飞沫或气溶胶的操作
答：主要包括苯唑西林（预测对青霉素的敏感性）、万古霉素、红霉素或阿奇霉素、克林霉素、加替沙星或左氧氟沙星、利奈唑胺等。如果1μg/片苯唑西林的结果为≤19mm时或该菌为
答：主要包括β溶血链球菌和α溶血（草绿色）链球菌。对于β溶血链球菌的药敏主要包括青霉素或氨苄西林、红霉素、克林霉素、头孢吡肟或头孢噻肟或头孢曲松、万古霉
答：纸片扩散法试验就是Kirby-Bauer（K-B）试验。是临床微生物学实验室最常规的药敏感性试验的方法。其原理是：将浸有抗菌药的纸片贴在涂有细菌的琼脂平皿上，抗菌药在琼脂内向四周扩
答：该方法包含4个主要的操作步骤：①药敏平皿的制备；②待测菌的菌液制备；③菌液接种；④含抗菌药纸片的放置。完成上述前3个步骤后，放入35℃温室或温箱培养16～18小时后阅读结果。
答：即上述4个步骤的规范化操作。①药敏培养平皿，M-H琼脂培养基（对胸腺嘧啶的核苷含量是否超标要用粪肠球菌ATCC 29212质控），培养基厚度约4mm等。②待测菌的菌液制备和接种：从过夜
答：将药敏平皿倒置，在反射光下测量。若链球菌属、嗜血杆菌属因血平皿或特殊营养物质补充平皿的影响，可将平皿盖移去，在反射光下测量。而对于某些特殊的细菌和抗菌药则需要采用透
答：主要有以下几点：①优质的药敏培养基；②标准的细菌接种菌量；③正确含量的抗菌药纸片及保存环境；④合适的培养环境；⑤有效的质量控制；⑥训练有素的技术人员。以上条件缺一不可。
答：①pH：pH的变化可对药敏试验的抑菌圈直径大小造成影响。如pH偏低将导致大环内酯类和喹诺酮类药物的抑菌圈变小或导致四环素类药物的抑菌圈直径变大。②培养基中含有能拮抗抗
答：操作卡：各微生物学实验室应建立标准的培养基操作卡，内容包括培养基的成分，配制及注意事项。培养基的质量要求：①配制记录：应注明培养基原料的开封日期、储存条件、有效期、有否
答：不同的国家由于参照的标准有所差别，故培养基的要求也有所不同。如美国CLSI标准文件要求纸片法药敏试验所用的培养基必须是M-H培养基；而英国参照的是BSAC标准文件，其要求的培
答：菌液标准浓度为0.5麦氏单位，相当于1.5 × 108CFU/ml。接种菌液浓度过高，抑菌圈会变小，而产酶菌株则更能破坏药物的抗菌活性；反之，菌液浓度过低，抑菌圈就会增大。
答：①抗菌药的分子量大小：分子量越小，抗菌药越容易在琼脂中扩散，敏感菌株形成的抑菌圈也就越大，如青霉素、磷霉素、利福平等。分子量越大，抗菌药则不易在琼脂中扩散，敏感菌株形成的
答：有所差别。①大部分需氧菌的培养条件为：35℃± 2℃，空气培养，16～18小时。如肠杆菌科细菌、假单胞菌属细菌、葡萄球菌属、肠球菌属、霍乱弧菌等。②不动杆菌属、洋葱伯克
答：有所差异。葡萄球菌属和肠球菌属的常规培养条件均为：35℃± 2℃，空气培养，16～18小时。但在葡萄球菌属药敏试验中，检测苯唑西林、甲氧西林、奈夫西林和万古霉素时，培养时间
答：K-B法药敏试验的注意事项主要有：①K-B法所用琼脂为标准的M-H琼脂，该琼脂具有以下几个特点：琼脂成分以及pH水平得到了严格的控制；M-H琼脂上同一抗菌药对同一株细菌的抑菌圈直径
答：不一定。体外药敏试验条件较单一而恒定，而体内环境比较复杂。再者，抗菌药进入人体后还有一个吸收、分布的过程，必须能在感染部位达到有效浓度才能起到杀死病原菌的作用。
答：纸片扩散法主要用于对营养要求不高且生长速度较快的非苛养菌。如肠杆菌科细菌、非发酵菌、葡萄球菌、肠球菌和链球菌等。生长速度较慢的细菌如结核分子杆菌不宜采用纸片扩
答：杀菌剂必须阅读细菌完全被抑制的抑菌圈范围，如氨基糖苷类药物、β-内酰胺类药物等；而对于抑菌剂，只需阅读细菌80%被抑制的抑菌圈直径即可，如复方磺胺甲唑等。
答：药敏试验菌悬液制备主要有两种，一是直接菌落法，挑取纯分的单个菌落于无菌的生理盐水中，使菌液浓度为0.5麦氏浊度即可；二是生长法，采用增菌法制备菌液，将纯分的新鲜菌落接种于M-H
答：不同细菌其菌悬液的制备方法是不一样的。可采用直接菌落法或生长法制备菌悬液的细菌有：肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌属、洋葱伯克霍尔德菌、嗜麦芽窄食单胞菌、肠
答：质控菌株对抗菌药物纸片显示一定大小的抑菌圈，其抑菌圈直径的大小用某数值范围来表示，即质控结果可能出现的最小和最大抑菌环直径。此界限范围有95%的置信区间。抑菌圈直径
答：标准菌株必须是形态、染色反应、生理生化及血清学特性典型而稳定的菌株。实验结果重复性好，极少发生变异，可用《伯杰系统细菌学手册》提供的典型特征来对照。标准菌株可由专
答：标准菌株保存方法：为了保持标准菌株的最大活性，避免和减少细菌变异的机会可采用以下方法保存：冷冻干燥法：应用冷冻干燥机冻干菌种的方法是最理想的保存方法。但操作烦琐，菌种保
答：β溶血链球菌包括具有A群（化脓性链球菌）、B群（无乳链球菌）、C或G群抗原形成较大菌落（直径≥0.5mm）的化脓性链球菌，需要用肺炎链球菌ATCC 49619进行质量控制。需要使用M-H琼
如何对β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂复方制剂进行药敏质量控制？答：目前大多数临床微生物学实验室采用大肠埃希菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 25923、铜绿假单胞
答：应该倒置。因为涂布有菌液的药敏平皿在培养过程中会形成冷凝水，药敏平皿倒置培养，可以避免在培养的过程中形成的冷凝水滴落到琼脂表面，而导致细菌被污染或琼脂中从纸片扩散出
答：Andreas Edelmann等同时采用直接药敏试验和标准的微量肉汤稀释法检测了758株血培养阳性分离菌株。结果发现，对于革兰阳性菌和阴性菌，两者的符合率分别为93.9%、91.9%。
答：Stockes纸片比较法是用标准敏感菌株作为对照菌，与被试菌涂在同一琼脂平皿上，根据对照菌与受试菌在药物纸片周围产生的抑菌圈大小，判断受试菌株为敏感、中度敏感或耐药。本法
答：以一定浓度的抗菌药与含有受试菌株的培养基进行一系列对倍稀释，经培养后肉眼观察未见细菌生长管内所含最低药物浓度为该药对该试验菌的最低抑菌浓度（MIC）。稀释法的最大优点
答：稀释法药敏试验因其采用的介质不同可分为液体稀释法和琼脂稀释法，又可因试验时采用的器皿不一样分为试管稀释法和微量稀释法，或称常量法和微量法。前者使用无菌的13mm &time
什么是PAE？
答：即抗生素后效应（postantibiotic effect，PAE），指细菌与抗菌药短暂接触，当药物浓度下降低于MIC或消除后，细菌的生长仍受到持续抑制的效应。其临床意义在于，以前设计抗生素给药方案
答：关于PAE的机制，目前尚未完全阐明。可能的作用机制是：①细菌与抗菌药短暂接触后，产生非致死性损伤或抗生素与细菌靶位的持续结合，导致细菌恢复再生长时间延长。②抗菌药后促白
答：在肉汤稀释法测定药物对细菌的MIC基础上，可将肉眼无细菌生长的每管中取100μl试验菌液分别移种至不含抗菌药的琼脂平皿上；过夜培养后，每块平板上生长的菌落数< 0.1%的接种
答：稀释法药敏试验所用的抗菌药应为抗菌药标准品或商品，可直接取自药物制造厂家或其他商业途径，可接受的抗菌药标准品应带有标签，注明药物的通用名、批号、失效日期及效价（通常用
答：一般情况下，抗菌药物处于粉剂时容易保存，且有较好的稳定性，但配制成溶液后，稳定性较差。配制好的抗菌药物工作液如保存在4℃冰箱最好在一周内使用。−20℃或−60～&mi
答：由于各种抗菌药物的理化性质和水溶性是不一样的，因此在配制成溶液时必须考虑和选择合适的助溶剂和稀释液。可按《中华人民共和国药典》提供的抗菌药的参数来选择合适的助溶
答：抗菌药液一般无需灭菌处理。因为抗菌药液在配制的过程中所采用的仪器和材料均应是无菌的，整个稀释过程应在严格无菌条件下进行。因此抗菌药液被微生物污染的发生率极低。如
答：为减少抗菌药的蒸发和变质，试管应盖紧并于4～8℃保存。对大多数药物来说，稀释好的抗菌药溶液应在5天内使用。加好抗菌药溶液的微量稀释板应该用塑料袋密封包装并立即置于&minu
答：可以先将抗菌药液配制成10倍于工作液浓度的贮存液，然后分装至无菌的玻璃小瓶或无菌试管或Eppendorf管中，密封后贮存（最好为−60℃或更低，不可高于−20℃）。抗菌药贮
答：肉汤稀释法中，对需氧菌应采用阳离子调节的M-H肉汤（cation-adjusted Mueller-Hinton broth，CAMHB），但对苛养菌等特殊要求的细菌如嗜血杆菌属和链球菌属分别需要采用HTM培养基、
答：一般的情况下不需要。因为抗菌药有不同程度的蛋白结合力，在含有血清或血液的培养基中，游离的抗菌药分子少了会影响抗菌药物的抗菌活性。同时实验证明，羊血中的某些成分会拮抗
答：新制备的供琼脂稀释法药敏试验的含药琼脂平板可在当天使用或密封于塑料袋中4～8℃保存。如果用于参与试验，平板最多保存5天，用于常规试验时可更长。对一些不稳定的抗菌药如亚
答：可以采用多点接种仪进行受试菌的点种。点种前琼脂的表面必须干燥。点种的次序应按先点种不含抗菌药的质控平板（通常称受试菌生长质控平板），以检查接种菌的生长活性和纯度；随后
答：点种受试菌的药敏试验平板应于室温下放置几分钟直至点种点的菌液被吸干，肉眼不见点种菌液，然后将平皿倒置，于35℃孵育16～20小时。在检测耐万古霉素肠球菌和耐苯唑西林葡萄球菌
答：在读取和报告所测抗菌药对细菌的MIC前，应检查受试菌生长质控平板或对照管或对照孔（不含抗菌药）的细菌生长情况，以确定其是否被污染及接种量是否合适，以及抗菌药物对参与试验的
答：稀释法药敏试验的结果有时可能会出现“跳管”现象，即在某一浓度的抗菌药中无细菌生长，但比其高和低的浓度中却可见细菌生长。这种现象俗称“跳管”。如
答：检测抑菌剂如磺胺类药物的MIC时，由于抑菌剂只能起到抑制细菌生长的目的，因此在MIC终点之上的微量孔内仍存在淡淡的沉淀菌斑，此现象称为“拖尾”。与生长质控对照相
答：CAMHB肉汤为阳离子调节肉汤（cationadjusted Mueller-Hinton broth），是肉汤稀释法药敏试验的推荐培养基，具有以下几点：①对药敏试验显示较好的批间重复性；②对磺胺、甲氧苄啶和四
答：M-H肉汤在室温（25℃）下其pH应为7.2～7.4。肉汤中二价阳离子的合适范围应是：Ca2+为20～25mg/L，Mg2+为10～12.5mg/L。阳离子浓度不合适会影响氨基苷类对铜绿假单胞菌、四环素对所有细
答：一般生产厂家提供的是阳离子含量已调整好的M-H肉汤，因此只有在生产厂家证实或是用原子吸收光谱法测量发现最初的M-H肉汤不含Ca2+、Mg2+或含量不够时，才可按下面方法调整阳离
答：每批新制备的M-H肉汤都要用一套标准的质控菌株来评估，如果未达到预期的MIC值，就应对阳离子含量及其他变量和成分进行检查。为确定培养基是否适用于磺胺类药和甲氧苄啶的试验
答：稀释法药敏的影响因素主要有：①M-H肉汤的pH及其中的阳离子浓度；②抗菌药浓度配制的正确与否；③细菌接种菌量的影响；④整个操作过程是否无菌操作；⑤其他人为因素，如操作失误等。
答：更改药敏试验中任一材料或方法时，应进行质控试验以确证这些更改不会对采用原有方法获得的结果产生影响。质控天数见表：纸片法药敏试验质量控制试验频率参考指南注1：使用本指
答：更改药敏试验中任一材料或方法时，应进行质控试验以确证这些更改不会对采用原有方法获得的结果产生影响。质控天数见表：MIC法药敏试验质量控制试验频率参考指南
答：E-test（产品名PDM Epsilometer test，E-test）是一条宽5mm，长60mm的无活性塑料薄条，其表面标有以μg/ml为单位的抗菌药浓度MIC判读刻度，并标出是何种抗菌药，背面含有干化、稳定的
答：将E-test条被放至一个已接种细菌的琼脂平板时，其载体上的抗菌药迅速且有效地释放入琼脂，从而在试剂条下方马上建立了一个抗菌药浓度的连续的梯度，经孵育后，当细菌的生长清晰可
答：操作步骤与纸片扩散法相同。先将制备好的0.5麦氏浊度的菌悬液均匀涂布于M-H琼脂表面，然后用无菌镊子将E-test条贴于琼脂上，每个直径9cm的琼脂平皿内可放含药塑料带1～2条，直径
答：这是因为，E-test试剂条中抗菌药浓度由高至低连续梯度分布，抗菌药浓度越高形成的抑菌圈越大。因此，由上至下形成的是一直径递减的抑菌圈，不同大小的抑菌圈拟合成一个椭圆形。
答：试剂条两边产生不同的交界点，读取较高数值侧的MIC，下图所示，MIC = 0.5µg/ml。如果两侧差> 1个稀释度，须重复试验。试剂条两边抑菌圈高度不等时E-test结果阅读
答：忽略试剂条周边的薄线生长，它常为细菌沿水渠生长的结果，如下图所示，MIC = 0.25µg/ml。试剂条边缘有细菌生长时E-test结果阅读
答：忽略溶血链球菌的溶血圈，读取生长完全被抑制处的MIC值，如下图所示，MIC = 0.032µg/ml。溶血性链球菌E-test结果阅读
答：抑菌圈内出现散在菌落是由低水平耐药突变引起的，阅读时要注意。如下图所示，其MIC > 256µg/ml。抑菌圈内出现散在菌落时E-test结果的阅读
答：本法可用于营养要求较高、生长缓慢或需特殊培养条件的病原菌的药敏试验，如流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌、空肠弯曲菌和厌氧菌等，具有操作简单、结果容易判断等特点
如何保存E-test条？
答：保存方法与抗菌药纸片相同。未开封的E-test条可长时间保存于−40℃环境中；已开封但尚未用完的E-test条必须密封后保存于−40℃或4℃冰箱中。使用前必须待试剂条
答：①注意E-test条必须在有效期范围内；②贴于琼脂表面时，一定要注意有刻度的一面要朝上；③试剂条一旦贴于琼脂表面即不可随意移动，因为E-test条中的抗菌药会在贴于琼脂的瞬间释放
