（二）换液与传代

原代培养癌细胞旺盛增殖后，消耗了培养基中营养，产生的细胞代谢产物对癌细胞继续增殖都会产生不利影响，因此需要及时更换培养液。通常细胞产生酸性代谢产物，培养上清呈黄色（培养瓶中含有酚红pH指示剂）时，需要及时换液，癌细胞在对数期增殖迅速，每天均需换液，倍增时间较长的细胞可以隔日换一次。当在显微镜下观察到上皮样细胞汇合达50%左右，可见细胞层上堆积有圆形的细胞，指示细胞增殖活跃时就可以传代。冻存和复苏细胞是建系过程中必须的步骤，也是为科研提供可应用的细胞来源。建立癌细胞系需要在体外进行长期培养和传代，传代50次 ......