第二节 反转录PCR

普通RT-PCR是从细菌或细胞及组织中直接提取mRNA，通过反转录酶将其转录成为cDNA并进行扩增，以用于后续实验。实际包含两个步骤，即反转录和PCR扩增。在提取RNA时，常用的方法是使用异硫氰酸胍裂解和氯化铯梯度离心，或者异硫氰酸胍加酚-氯仿一步法，目前也有商品化的Trizol可以使用，破裂组织，溶解蛋白质，使核糖核酸酶失活，经异丙醇沉淀得到较为完整的RNA。5）将反转录完成的总cDNA与用生物素标记的基因组DNA进行杂交孵育24h。6）已经用链亲和素包被的磁珠与cDNA-DNA-生物素复合物混匀作用一 ......